服务简介

 验证mir与其靶基因的相互作用最常用的方法便是双荧光素酶验证试验。荧光素(Luciferase)是自然界中能够产生生物发光的酶的统称，其中最有代表性的是来自萤火虫 (Firefly) 体内和海肾(Renilla)体内的两类萤光素酶，分别命名为F-Luciferase和R-Luciferase。萤火虫荧光素酶灵敏度高，检测线性范围宽达7～8个数量级，是最常用于哺乳细胞的报道基因。

普舟基因所使用的荧光素酶报告基因载体psi-CHECK2双荧光系统，其中海肾荧光素酶作为检测报告基因，而萤火虫荧光素酶则作为内参报告基因。验证miRNA与mRNA/lncRNA/circRNA的互作，将要研究的靶点序列（序列可以是mRNA的3’UTR，也可以是lncRNA/circRNA序列）插入到报告载体中，与miRNA的mimic共同转染细胞，如果荧光素酶表达量下降（荧光信号下降），提示序列包含miRNA的靶点。

 

 

 

服务流程

1、miRNA跟靶基因的生信预测分析；

2、构建野生型及突变型载体；

3、合成miRNA模拟物mimics；

4、将报告载体与模拟物（mimic）或抑制物（inhibitor）共转染待检细胞；

5、酶标仪检测报告基因的表达水平，及结果分析；

 

实验分组

 

客户提供

1、 目的基因、目的miRNA的相关信息；

2、指定转染细胞，如无特定要求，一般选择293T细胞；

 

交付产品

1、原始数据、整理结果图片；

2、质粒构建报告及测序结果；

3、完整的实验报告；

 

预期结果

(一）结合位置

 

（二）统计分析